Взятие, обработка и хранение крови

Одним из самых распространенных биологических материалов для лабораторных исследований является кровь. Для изучения применяется цельная кровь, плазма, сыворотка или клетки крови.

Взятие крови следует проводить в резиновых перчатках, соблюдая правила асептики: обрабатывая перчатки 70% спиртом перед каждым взятием.

Для исследования цельной крови используют либо кровь с антикоагулянтом, либо осуществляют забор капиллярной крови.

Капиллярную кровь отбирают путем прокола мякоти пальца (лучше IV пальца) индивидуальным стерильным копьем, палец предварительно и после забора крови протирают стерильным тампоном (ватным шариком), смоченным в 70% этиловом спирте. Из-за вероятного разведения крови спиртом, оставшимся на пальце, необходимо следить, чтобы палец во время прокола был сухим. Совершенно недопустимо использование одной микропипетки для нескольких пациентов! Допускается нанесение нескольких капель крови обследуемого на чистое часовое стекло, откуда и производится забор крови в микропипетку. Извлекать скарификаторы следует только с помощью пинцета, хранящегося в растворе дезинфицирующего средства. Стерильные тампоны хранятся в упаковке из бумаги, указанной в ОСТе 42-21-2–85, в количестве не более 20 штук. Стерильные лабораторные инструменты хранятся в той же упаковке, в которой проводилась их стерилизация.

При получении сыворотки антикоагулянт не используют. Венозную кровь берут утром натощак путем пунктации локтевой вены сухой острой короткой иглой с широким просветом (без шприца) непосредственно в пробирку по стенке. Предпочтительнее применять одноразовые пластмассовые пробирки, так как может происходить обмен ионами между кровью и стеклом, не исключены следы моющих средств. Требуется учитывать положение тела (сидя или лежа) и при повторных исследованиях, по возможности, производить взятие крови так же.

При взятии крови из артериального или венозного катетера необходимо предварительно удалить остатки лекарственного раствора из системы. Это производится путем отсасывания шприцом небольшого количества крови, и только после этого отбирают кровь вторым шприцом.

Выбор материала (цельная кровь, плазма, сыворотка или клетки крови) зависит от целей исследования и определяемого показателя:

1. Может определяться разницей в содержании определяемого вещества в капиллярной и венозной крови (табл.1).

2. Возможны различия в содержании метаболитов в клетках крови и жидкой ее части:

  • например, мочевина и глюкоза равномерно распределены между плазмой и эритроцитами, поэтому эти показатели можно определять как в цельной крови, так и в сыворотке (плазме).
  • для большинства исследований нужно использовать сыворотку или плазму (для определения неравномерно распределенных микроэлементов и билирубина), при этом нужно учитывать, что в процессе свертывания крови и стоянии сыворотки над сгустком происходит разрушение форменных элементов. Это искажает результаты исследования как за счет увеличения жидкой части пробы, так и из-за выхода некоторых веществ.
  • необходимо также учитывать, что плазма крови более богата белками, а в сыворотке крови отсутствуют белки свертывающей системы, участвующие в образовании фибринового сгустка.
  • в некоторых случаях рекомендуется использовать плазму крови. К примеру, ионы калия и ряд ферментов (кислая фосфатаза, аргиназа, ферменты гликолиза, аминотрансферазы) в значительном количестве содержатся в тромбоцитах и эритроцитах и освобождаются из них в процессе свертывания.
Таблица 1.
Сравнительная концентрация некоторых метаболитов
в капиллярной и венозной крови
Определяемое вещество
Содержание
в капиллярной крови
Содержание
в венозной крови
Глюкоза выше ниже
Лактат, пируват ниже выше
Холестерин, кальций, натрий,
калий, хлор, фосфаты, мочевина, общий белок, альбумин
одинаковое

Плазму крови получают с использованием различных антикоагулянтов (табл.2). В пробирку с антикоагулянтом набирают кровь, немедленно перемешивают (без пузырьков), выдерживают при комнатной температуре или лучше в ледяной бане в течение 20-30 мин и затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. При определении активности ферментов центрифугирование проводят при 4-6°С в рефрижераторных центрифугах. Сразу отделяют плазму от осевших клеток в сухой чистый флакон.

3. При необходимости исследовать показатели метаболизма клеток крови также используют антикоагулянты при получении крови во избежание разрушения клеток и получения ложных результатов.

Желательно проводить исследования в свежем материале, но если необходимо хранение, то хранить при –20°С (размораживать можно только однократно, поэтому лучше предварительно разлить плазму на порции).

Таблица 2
Антикоагулянты, используемые для получения плазмы, и
рекомендации к их применению.
Антикоагулянт
Соотношение
кровь / антикоагулянт
Не рекомендуется
для определения
Оксалат натрия, 1,5% 1 часть раствора на 20 частей крови Кальций, pH, ферменты, электролиты
Цитрат натрия, 3,8% 1 часть раствора на 9 частей крови Кальций, pH, ферменты, электролиты
Этилендиаминтетраацетат
натрия, 1,5%
1 часть раствора на 20 частей крови Кальций, pH, ферменты, электролиты

Гепарин 3,0% (гепаринат Na, K или Li),
или 1000 ЕД/мл

1 часть раствора на 20 частей крови или 50 ЕД гепарина на 1,0 мл крови Электролиты, щелочная фосфатаза, аммиак
Цитратно-глюкозная смесь, содержащая
24 мМ лимонной кислоты,
62 мМ Na3-лимон­нокислого, 139 мМ глюкозы
1 часть раствора на 4 части крови Электролиты

Для получения сыворотки кровь оставляют при комнатной температуре на 15 мин, затем тонкой стеклянной палочкой (или лучинкой, пастеровской пипеткой) аккуратно, не разрушая клетки, отделяют сгусток от стенок пробирки и центрифугируют 10-15 мин при 3000 об/мин. Сразу после центрифугирования отделяют сыворотку от сгустка.

Гемолизированную сыворотку и плазму для анализа не рекомендуется использовать, т.к.:

  • в нее поступают метаболиты из разрушенных клеток, которые могут вступить в реакцию с определяемым веществом или компонентами рабочего реактива;
  • гемоглобин искажает результаты фотометрии (в этом случае необходимо делать контроль на окраску плазмы);
  • гемоглобин может взаимодействовать с исследуемыми веществами и влиять на активность ферментов.

    Вы можете спросить или оставить свое мнение.