Общий белок

Все известные способы определения концентрации общего белка подразделяют на следующие группы:

1. Азотометрические, основывающиеся на установлении количества белкового азота, для нахождения концентрации белка исходят из того, что содержание азота в белках составляет 16%, поэтому используется коэффициент 6,25. Способ неточен, так как содержание азота в различных белковых молекулах колеблется от 14 до 19%.

2. Способы, состоящие в определении плотности сыворотки — способ плавающей капли, также является неточным из-за влияния на плотность других веществ, находящихся в сыворотке.

3. Весовые (гравиметрические) — весьма трудоемки и требуют больших количеств сыворотки.

4. Рефрактометрические методы — просты в исполнении, но неточны, так как рефракция сыворотки обусловливается также минеральными веществами и углеводами.

5.Колориметрические, основанные на цветных реакциях белков:

  • методы, основанные на неспецифическом связывании красителя (простой абсорбции), достаточно чувствительны, но степень связывания красителя зависит от индивидуальных свойств белка (метод с кумасси бриллиантовым голубым).
  • биуретовый метод — наиболее широко применяется в настоящее время, основан на специфической реакции пептидной связи с ионами меди в щелочной среде с образованием продукта фиолетового цвета. Существуют разные модификации этого метода с целью увеличения интенсивности окраски и ее стабильности, повышения устойчивости реактива. Например, тартрат добавляют как стабилизатор, который при комплексировании с ионами меди предотвращает их осаждение в щелочной среде, KJ предотвращает спонтанное восстановление щелочного тартрата меди и осаждение оксида меди и, следовательно, повышает устойчивость реактива. Чувствительность и специфичность метода зависит от используемой длины волны: 540-580 нм, 263 нм или 310 нм. Метод считается самым специфичным и точным, так как присутствие ароматических аминокислот, фенолов, мочевой кислоты не влияет на биуретовую реакцию.
  • метод Лоури — основан на образовании вольфрамового синего и молибденового синего из фосфорномолибденовой и фосфорновольфрамовой солей реактива Фолина-Чикольте при взаимодействии их с ароматическими аминокислотами, в основном остатками тирозина, но определенный вклад дают триптофан, гистидин, цистеин. Максимум поглощения находится в диапазоне 745-750 нм. В составе рабочего реактива имеется биуретовый реактив, что позволяет определять также пептидные связи. К недостатку метода относится: во-первых, отрицательное влияние на развитие окраски веществ, используемых для выделения, очистки и солюбилизации белков (детергентов, компонентов буферных систем, сульфгидрильных и других восстанавливающих агентов, пуринов, глицина, сахарозы, сернокислого аммония и др); во-вторых, отсутствие линейной зависимости интенсивности окраски от количества белка-стандарта. Метод более чувствителен по сравнению с биуретовым, но специфичность его ниже, так как интенсивность окраски зависит от аминокислотного состава белка, а также от последовательности расположения аминокислот и степени экранирования функциональных групп.

6. Нефелометрические методы.

7. Поляриметрические методы.

8. Спектрофотометрические, заключающиеся в измерении степени cветопоглощения в ультрафиолетовой области при двух длинах волн с дальнейшим расчетом по специальным формулам (230 и 260 нм, 280 и 260 нм, 235 и 280 нм, 215 и 225 нм, 280 и 205 нм).

Унифицированные методы

Унифицированными методами определения общего белка являются:

  • в сыворотке крови — биуретовый метод;
  • в моче — полуколичественный метод Бранденберга-Робертса-Стольни­кова и нефелометрия (590-650 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой;
  • в ликворе — нефелометрия (410-480 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой и сульфатом натрия;
  • в жидкости серозных полостей — нефелометрия (590-650 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой.

Определение количества общего белка
в сыворотке крови биуретовым методом

Принцип

Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди, образуя хелатные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна числу пептидных связей.

Нормальные величины

Сыворотка крови (биуретовая реакция)
дети новорожденные 53-89 г/л
  до 6 лет 56-85 г/л
взрослые 65-85 г/л
Моча (нефелометрия) 10-140 мг/л
Слюна 0,2-0,4 г/л
Кал отсутствует
Желчь печеночная 1,4-2,7 г/л
  пузырная 4,5 г/л
Ликвор (нефелометрия)
новорожденные   0,6-0,9 г/л
взрослые   0,15-0,45 г/л
Амниотическая жидкость (биуретовая реакция)
ранние сроки беременности   2,0-17,0 г/л
поздние сроки беременности   1,8-7,1 г/л
Жидкость серозных полостей (нефелометрия)
транссудат   5-25 мг/л
экссудат   30-80 мг/л

Влияющие факторы

Завышенные результаты в сыворотке крови дают пробы с билирубинемией (>85 мкмоль/л) и триглицеринемией (>11,4 ммоль/л), увеличение отмечено при венозном стазе, в положении лежа. Концентрация общего белка в спинномозговой жидкости зависит от уровня позвоночного канала, на котором была взята проба.

Клинико-диагностическое значение

Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации. Для того, чтобы отличить абсолютные изменения в плазме от относительных необходимо установить объем плазмы либо определить гематокрит.

Сыворотка

Гипопротеинемия

Истинная (абсолютная) cвязана с:

  • недостаточным потреблением белка с пищей — заболевания желудочно-кишечного тракта, сужение пищевода (опухоли), недоедание, полное или частичное голодание.
  • снижением синтеза белка — несбалансированный аминокислотный состав пищи, хронические паренхиматозные гепатиты, интоксикации, злокачественные новообразования, лечение кортикостероидами.
  • усиленным распадом — кахексия, тяжелые инфекции, длительные воспалительные процессы, лихорадочные состояния, тиреотоксикозы.
  • потерей белка — нарушения проницаемости капиллярных стенок, кровоизлияния, ожоги, острые и хронические кровотечения, нефротический синдром и гломерулонефриты.

Относительная связана с нарушением водного баланса — гипергидратацией при гиперальдостеронизме, при почечной недостаточности со снижением экскреции солей, при использовании для питья морской воды, при неадекватных инфузиях солевых растворов.

Гипопротеинемия обычно сопровождается уменьшением фракции альбуминов крови (разведение).

Гиперпротеинемия

Истинное повышение концентрации белка в крови обычно сопровождается увеличением фракции глобулинов. Встречается при острых инфекциях– увеличение синтеза белков острой фазы, при хронических — за счет γ-глобулинемии, выявляется при болезни Вальденштрема (образование патологических белков – парапротеинов), при миеломной болезни, лимфогрануломатозе, саркоидозе.

Относительная гиперпротеинемия вызывается потерями внутрисосудистой жидкости в результате профузных поносов (например, холере), усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, тяжелых и обширных ожогах, генерализованных перитонитах.

Моча

Небольшое количество белка в суточной моче присутствует и у вполне здоровых лиц, однако в разовой порции мочи такие концентрации обычными методами не выявляются. Часть этих белков сывороточного происхож­дения, другая часть является продуктом мочевыводящих путей.

Обнаружение в моче белков чаще всего свидетельствует о заболеваниях почек с нарушением почечного фильтра. Принято подразделять протеинурию в зависимости от места возникновения:

  • преренальную, связанную с усиленным распадом белков тканей или выраженным гемолизом;
  • ренальную, обусловленную патологией клубочков или канальцев почек;
  • постренальную, связанную с воспалением мочевыводящих путей.

Спинномозговая жидкость

Повышение количества общего белка в спинномозговой жидкости наблюдается при заболеваниях, приводящих к нарушению гематоэнцефалического барьера (менингит, энцефаломиелит).

Амниотическая жидкость

Исследование количества белка применяют для контроля за течением беременности.

    Вы можете спросить или оставить свое мнение.