Белковые фракции

Состав и количество фракций белков в биологических жидкостях зависит от применяемого метода фракционирования:

1. Осаждение

  • нейтральными солями (высаливание) - способность белков плазмы выпадать в осадок при воздействии на них растворов солей различных концентраций,
  • этиловым спиртом при низкой температуре;

2. Электрофоретическое фракционирование — различают несколько типов электрофореза в зависимости от поддерживающей среды. В качестве поддерживающих сред используют бумагу, ацетатцеллюлозную пленку, агаровый, полиакриламидный, крахмальный гели. При проведении электрофореза необходимо учитывать факторы, влияющие на подвижность разделяемых веществ:

  • заряд (обычно зависит от pH), размеры и форма молекул веществ;
  • электрическое поле: скорость миграции ионов прямо пропорциональна силе тока, обусловленной переносом ионов буфера и образца, напряжению и обратно пропорциональна сопротивлению (зависит от типа и размеров носителя и ионной силы буфера);
  • тип буфера: состав, концентрация, pH, ионная сила. Ионная сила равна сумме n составляющих: сnzn2 / 2, где сn — молярная концентрация n-ого иона, z — заряд этого иона;
  • носитель: учитывается его гидрофильность, адсорбция веществ на молекулах носителя, электроосмос, диффузия.

3. Иммунологические методы — основаны на иммунных свойствах белковых фракций: иммуноэлектрофорез, электроиммунодиффузия, радиальная иммунодиффузия, радиоиммунный анализ;

4. Седиментационный анализ — основан на различной зависимости скорости оседания белков от массы и величины их молекулы;

5. Ионообменная, адсорбционная, распределительная, аффинная хроматография, гель-фильтрация.

Наиболее распространенным методом фракционирования является электрофорез, основанный на разной скорости движения белков в электрическом поле, в зависимости от величины заряда и молекулярной массы. Количество выделяемых фракций определяется условиями проведения электрофореза и качеством поддерживающей среды. Так, например, при электрофорезе на бумаге и пленках ацетата целлюлозы выделяют 5 фракций (альбумины, α1–, α2–, β– и γ–глобулины), в то время как в полиакриламидном геле — до 20 и более фракций. При использовании более совершенных методов (радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и других) в составе глобулиновых фракций выявляются многочисленные индивидуальные белки.

За основу классификации белков по фракциям принято разделение белков на бумаге. На протеинограмму оказывают влияние только те белки, концентрация которых достаточно высока.

В клинико-диагностических лабораториях наиболее распространены методы электрофореза на бумаге и на ацетатцеллюлозных пленках. В качестве унифицированного утвержден метод электрофореза на ацетатцеллюлозных пленках.

Метод электрофоретического разделения белков на бумаге и ацетатцеллюлозных пленках

Принцип

Коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока: в щелочной среде к аноду, в кислой — к катоду. В щелочной среде наиболее быстро перемещаются альбумины, α1-, α2- и β-глобулины.

Более подробное описание метода электрофореза можно прочитать здесь.

Определение белковых фракций сыворотки крови экспресс-методом

Принцип

Фосфатные буферы разной молярной силы осаждают соответствующие фракции белка, при этом более концентрированные буферы осаждают более мелкодисперсные фракции белка. По степени мутности судят о концентрации фракций белка.

Нормальные величины

Сыворотка крови
преальбумин 0,6-1,4% 0,18-0,38 г/л
альбумин 50-70% 30-50 г/л
α1-глобулины 3-6% 1-3 г/л
α2-глобулины 9-15% 6-10 г/л
β-глобулины 8-18% 7-11 г/л
γ-глобулины 15-25% 8-16 г/л
Cоотношение альбумин / глобулины  1,5-2,3
Спинно-мозговая жидкость
преальбумин 2-7%
альбумин 56-76%
α1-глобулины 2-7%
α2-глобулины 4-12%
β-глобулины 8-18%
γ-глобулины 3-12%
Моча
альбумин 20%
α1-глобулины 12%
α2-глобулины 17%
β-глобулины 43%
γ-глобулины 8%

Клинико-диагностическое значение

Диагностическое значение измерения преальбуминв и альбумина рассмотрено здесь

Сыворотка

Глобулины

На практике диагностически значимо только повышение уровня белковых фракций. 

Повышение α1- и α2-глобулиновой фракции связано с острыми и подострыми воспалительными процессами и некоторыми злокачественными опухолями, травмами, т.к. сюда входит большинство белков острой фазы (С-реактивный белок, α2-макроглобулин, α1-гликопротеид, α1-антитрипсин, церулоплазмин, гаптоглобин).

Большая часть белков β-глобулиновой фракции является β‑липопротеинами, поэтому повышение этой фракции чаще всего связано с гиперлипопротеинемиями. Кроме того, влияние на динамику этой фракции оказывают трансферрин, гемопексин, компоненты системы комплемента.

Фракция γ‑глобулинов увеличивается при патологических состояниях, связанных с хроническими воспалительными процессами, т.к. содержит иммуноглобулины G, A и M.

'
    '

    Вы можете спросить или оставить свое мнение.