Триацилглицерины

Триацилглицерины — сложные эфиры глицерина и высших жирных кислот. В их составе в наибольшем количестве содержатся насыщенные м мононенасыщенные жирные кислоты – стеариновая, пальмитиновая, пальмитоолеиновая. В плазме крови триацилглицерины транспортируются исключительно в составе липопротеинов, главным образом, хиломикронов и липопротеинов очень низкой плотности, осуществляющих транспорт триацилглицеринов из мест синтеза к местам утилизации. Циркулирующие в крови ЛПОНП и хиломикроны атакуются гепарин‑зависимым ферментом липопротеинлипазой, локализованной на поверхности эндотелия капилляров. Освобождающиеся жирные кислоты поступают в клетки, где используются для получения энергии.

Среди методов определения триацилглицеринов выделяют следующие основные группы методов: косвенные (вычислительные), химические и хроматографические методы определения.

Вычислительные методы основываются на результатах исследования уровня общих липидов, холестерина, фосфолипидов. Применение этих методов ограничено, так как они сложны, включают много операций, каждая из которых может быть источником ошибок.

Хроматографические методы позволяют, кроме триацилглицеринов, определять содержание других липидных фракций, при этом чаще используются методы тонкослойной и газожидкостной хроматографии.

Химические методы определения основаны на определении уровня глицерина, образующегося при гидролизе триацилглицеринов, и обычно включают 3 основных этапа:

1 этап. Экстракция всех липидов из биологического материала органическими растворителями (хлороформ, гептан). Вследствие того, что глицерин образуется также при гидролизе фосфолипидов и глюкозы, очистка фракции триацилглицеринов осуществляется их дополнительной экстракцией из смеси (обычно изопропанолом) либо применяется адсорбент для фосфолипидов и моносахаридов (кремниевая кислота, сернокислая медь, карбонат кальция, силикагель).

2 этап. Гидролиз экстрагированных триацилглицеринов:

  1. химический, основан на щелочном омылении жиров экстракта с освобождением глицерина.
  2. ферментативный, например метод Буколо‑Дэвида, базирующийся на гидролизе триацилглицеринов липазой. Метод является более специфичным, так как не происходит высвобождения глицерина из фосфолипидов и глюкозы.

3 этап. Количественное определение образовавшегося в результате гидролиза глицерина. Количество образованного глицерина определяют следующими методами:

  1. Энзиматические: первой реакцией этой группы методов является превращение глицерина в глицерол‑3‑фосфат под действием глицерокиназы при участии АТФ. В дальнейших реакциях могут участвовать оба продукта (АДФ и глицерол‑3‑фосфат):
  • определяется количество образованного АДФ по убыли поглощения при 340 нм при накоплении НАД:

АДФ + Фосфоенолпируват Пируваткиназа АТФ + Пируват

Пируват + НАДН Лактатдегидрогеназа Лактат + НАД

  • определяется концентрация глицерол‑3‑фосфата по накоплению НАДН:

Глицерол‑3‑Ф + НАД Глицерол-3-фосфат-дегидрогеназа Дигидроксиацетонфосфат + НАДН

  • при модификации метода образованный в предыдущих реакциях НАДН может быть использован для восстановления тетразолия нитросинего с образованием формазана при участии феназинметасульфата и колориметрией при 505 нм.
  • также образованный глицерол‑3‑фосфат может быть окислен при действии оксидазы:

Глицерол‑3‑Ф + О2 Глицерол-3-фосфат-дегидрогеназа Дигидроксиацетонфосфат + Н2О2

Образованная перекись водорода взаимодействует с 4‑аминофеназоном, 4‑аминоанти­пирином и др. в присутствии пероксидазы, образуя хромоген с максимумом абсорбции при 505 нм.

  1. Химические, используется наиболее часто, определение глицерина проводят после его окисления перйодатом до формальдегида, содержание последнего устанавливают:
  • по его реакции с ацетилацетоном и ацетатом аммония с образованием 3,5‑диаце­тил‑1,4‑дигидролутидина, уровень последнего определяют при помощи флюориметрии (возбуждение 400 нм, испускание 485 нм) или колориметрически при длине волны 412 нм.
  • по реакции с хромотроповой кислотой (реакция Ламберта‑Нейша), образуется темно‑фиолетовое окрашивание. На этой реакции основаны методы Карлсона и Ганделя‑Зильверсмита.
  • в реакции с 3‑метил‑2‑бензотиазолином и хлоридом железа и колориметрией при 620 нм.
  • в реакции со смесью фенилгидразин – цианид железа – соляная кислота с максимумом абсорбции 540 нм.

В качестве унифицированных утверждены два метода: по реакции с ацетилацетоном после экстракции смесью гептана и изопропилового спирта и метод по реакции с хромотроповой кислотой.

Определение содержания триацилглицеринов
по реакции с ацетилацетоном

Принцип

Триацилглицерины экстрагируются органическими растворителями, омыляются едким кали с образованием глицерина, при окислении которого перйодатом натрия образуется формальдегид. Последний, реагируя с ацетилацетоном, дает окрашенный комплекс 3,5‑диацетил-1,4‑дигидролутидин.

Нормальные величины

Сыворотка (реакция с ацетилацетоном)
возраст мужчины,
ммоль/л
женщины,
ммоль/л
кровь из пуповины 0,11‑1,11 0,11‑1,11
0 ‑ 5 лет 0,34‑0,97 0,36‑1,12
6 ‑ 11 лет 0,35‑1,22 0,40‑1,29
12 ‑ 15 лет 0,41‑1,56 0,46‑1,56
16 ‑ 19 лет 0,45‑1,84 0,45‑1,45
20 ‑ 29 лет 0,50‑2,09 0,45‑1,45
30 ‑ 39 лет 0,55‑3,21 0,43‑1,81
40 ‑ 49 лет 0,63‑3,37 0,50‑2,10
50 ‑ 59 лет 0,70‑3,25 0,62‑2,79

Вляющие факторы

in vivo — завышают результаты этанол, кортикостероиды, эстрогены, стресс, высокоуглеводное питание, занижают — гепарин, аскорбиновая кислота. Определение предпочтительнее проводить в плазме, полученной с трилоном, так как триглицериды чувствительны к действию сывороточных ферментов, например, липазы, активируемой гепарином.

Клинико‑диагностическое значение

Выделяют первичные и вторичные гипертриацилглицеринемии:

Первичные гипертриглицеринемии обнаруживаются при гиперлипопротеинемиях типа I, IIb, III, IV, V (см "Липопротеины сыворотки крови"), при генетическом дефиците фермента лецитин:холестерин-ацил-трансферазы.

Вторичное повышение фракции триацилглицеринов наблюдается при нефротическом синдроме, переломах костей, подагре, сахарном диабете (транспортная липемия), гипотиреозе, острых и хронических панкреатитах, беременности, билиарном циррозе, беременности, алкоголизме.

Снижение уровня триацилглицеринов отмечается при гипертиреозе, синдроме мальабсорбции, гиполипопротеинемии.

    Вы можете спросить или оставить свое мнение.